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尿激酶活性测定

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       比活测定  

       (1) 试剂  牛纤维蛋白员溶液  取牛纤维蛋白员      ,加巴比妥一氯化钠缓冲液(pH 7.8)制成每1ml 中含6.67mg可凝结蛋白的溶液。        

       牛凝血mei溶液  取牛凝血mei,加巴比妥-氯化钠缓冲液(pH 7.8)制成每1ml 中含6.0 单位的溶液。     

       牛纤维蛋白溶酶原溶液  取牛纤维蛋白溶液酶原 ,加三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0 )制成每1ml 中含1 ~1.4 酪蛋白单位的溶液(如溶液浑浊 ,离心 ,取上清液备用) 。

       混合溶液  临用前取等容积的牛凝血mei溶液和牛纤维蛋白溶酶原溶液 ,混匀。


       (2) 标准品溶液的制备  取尿激酶标准品 ,加巴比妥-氯化钠缓冲液(pH 7.8)制成每1ml 中含60单位的溶液  。                                                    


       (3) 供试品溶液的制备  取本品适量,用巴比妥-氯化钠缓冲液(pH 7.8)溶解、混匀  ,并稀释成与标准品溶液相同的浓度。                                          


       (4) 测定法  取试管4 支 ,各加牛纤维蛋白员溶液0.3ml ,置37℃±0.5℃水浴中  ,分别加入巴比妥-氯化钠缓冲液(pH7.8)0.9ml    、0.8ml 、0.7ml、0.6ml,依次加标准品溶液0.1ml  、0.2ml、0.3ml  、0.4ml  ,再分别加混合溶液0.4ml  ,立即摇匀  ,分别计时    。反应系统应在30~40秒内凝结,当凝块内小气泡上升到反应系统体积一半时作为反应终点,记时。以尿激酶的浓度为横座标,以反应终点时间与入水浴时间的差值为纵座标,在双对数纸上绘制标准曲线,应呈直线  。供试品按上法测定,在标准曲线上求得效价(单位) 。标准品和供试品各作二次   ,所得的直线亦应平行     ,否则应重复试验 。


       蛋白质含量  取本品约10mg  ,精密称定,照氮测定法(附录Ⅶ D第二法)测定 ,将结果乘以6.25  ,即得供试品中蛋白含量  ,并计算每1mg供试品中的蛋白量(mg) 。


       比活   按下式计算比活 。


                        每1mg供试品的效价(单位)


                    比活=──────────────


                        每1mg供试品中蛋白量(mg)


尿激酶活性测定 2017-8-22 本文被阅读 4109 次
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